实验室常用贮液与溶液介绍
一.常用贮液与溶液
1mol/l亚精胺(spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
1mol/l精胺(spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
10mol/l乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1l后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(bsa):加100mg的牛血清蛋白(组分v或分子生物学试剂级,无dna酶)于9.5ml水中(为减少变性,
须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/l二硫苏糖醇(dtt):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/l二硫苏糖醇溶液。
8mol/l乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/l氯化钾(kcl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/l乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的ph至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/l edta:配制等摩尔的na2edta和naoh溶液(0.5mol/l),混合后形成edta的三钠盐。或称取186.1g的na2edta·2h2o和20g的naoh,并溶于水中,定容至1l。
1mol/l hepes:将23.8ghepes溶于约90ml的水中,用naoh调ph(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/l hcl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/ml ipgt:溶解250mg的ipgt(异丙基硫代-β-d-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。
1mol/lmgcl2:溶解20.3gmgcl2·6h2o于足量的水中,定容到100ml。
100mmol/l pmsf:溶解174mg的pmsf(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶k(proteinase k):将200mg的蛋白酶l加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶k完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlrnase(无dnase)(dnase-free rnase):溶解10mg的胰蛋白rna酶于1ml的10mmol/l的乙酸钠水溶液中(ph 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使dna酶失活。用1mol/l的tris-hcl调ph至7.5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套)
5mol/l氯化钠(nacl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。
10n氢氧化钠(naoh):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9l水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1l。
10%sds(十二烷基硫酸钠):称取100gsds慢慢转移到约含0.9l的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1l。
2mol/l山梨(糖)醇(sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。
100%三氯乙酸(tca):在装有500gtca的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制)
2.5% x-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的x-gal于1ml的二甲基甲酰胺(dmf),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。
100×denhardt试剂(denhardt’s regent)
成分及终浓度 |
配制100ml溶液各成分的用量 |
2%聚蔗糖(ficoll,400型) |
2g |
依照上表称取各组分,溶于水中定容。过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮存。
10×标准dna连接酶缓冲液(standard dna ligase buffer)(粘端、平端连接)
成分及终浓度 |
配制10ml溶液各成分的用量 |
0.5mol/l tris-hcl |
5ml 1mol/l 贮液 |
将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃ 。
100 mmol/l dntp 溶液(dntp solutions)
可以购买到100mmol/l纯dntps贮液,-80℃可贮存至少6个月。
10mmol/l dntp混合液
成分及终浓度 |
配制20ul溶液各成分的用量 |
10mmol/l datp |
2ul 100 mmol/l datp 贮液 |
20%peg 8000/2.5mnacl
成分及终浓度 |
配制10ml溶液各成分的用量 |
质量浓度为20%聚乙二醇 |
20g |
加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。
20×ssc
成分及终浓度 |
配制1l溶液各成分的用量 |
300mmol/l 柠檬酸三钠(二水) |
88.2g |
溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9l水中,加几滴10n naoh溶液调ph为7.0,用水补足体积至1l。
depc(焦碳酸二乙酯)处理水
加100ul depc 于 100ml 水中,使depc的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h,然后在15 psi 条件下高压灭菌20min,以使残余的depc失活。depc会与胺起反应,不可用depc处理tris缓冲液。
甲酰胺(deionized formamide)
直接购买或加dowex xg8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。
磷酸缓冲液(phosphate buffer)
按照下表所给定的体积,混合1 mol/l 的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/l 磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需ph的磷酸缓冲液。配制1 mol/l 的磷酸二氢钠(nah2po4·h2o)贮液:溶解138g于足量水中,使终体积为1l;1mol/l 磷酸氢二钠(na2hpo4)贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1l。
1mol/l 磷酸二氢钠(ml) |
1mol/l 磷酸氢二钠(ml) |
最终ph值 |
877 |
123 |
6.0 |
te(用于悬浮和贮存dna)
成分及终浓度 |
配制100ml溶液各成分的用量 |
10mmol/l tris-hcl |
1ml 1mol/l tris-hcl(ph7.4-8.0,25℃) |
tris缓冲液(tris-hcl buffer)
将121g的tris碱溶解于约0.9l水中,再根据所要求的ph(25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6n),用水调整终体积至1l。
浓盐酸的体积(ml) |
ph |
8.6 |
9.0 |