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食品理化实验室里常规缓冲液配置方法介绍

在食品检验理化实验室里各种各样的缓冲液都需要自行配置,在我们日常的准备过程中都需要对缓冲液进行准备,缓冲液对我们日常的前处理有很大的影响,缓冲液配置也是食品检验中一种很重要的过程,以下是食品检验资格证培训小编总结的常用缓冲液配置方法,以供各位学员自行学习和配置。

1 m tris-hcl (ph7.4, 7.6, 8.0)

组份浓度:1 m tris-hcl    配制量:1 l

配制方法:1. 称量121.1 g tris置于1 l烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的ph值。4. 将溶液定容至1 l。5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定ph值,因为tris溶液的ph值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的ph值大约降低0.03个单位。

solution ii(质粒提取用)

组份浓度:200mm naoh,1%(w/v)sds 配制量:500ml

配制方法:1.量取下列溶液,置于500ml烧杯中,10% sds 50ml,2n naoh 50ml2.加灭菌水定容至500ml,充分混匀3.室温保存,此溶液保存时间最好不要超过一个月,注意:sds易产生气泡,不要剧烈搅拌

solution iii(质粒提取用)

组份浓度:3 m koac, 5 m ch3cooh 配制量:500 ml

配制方法:1. 称量下列试剂,置于500 ml烧杯中。koac 147g、ch3cooh57.5ml2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。4. 高温高压灭菌后,4℃保存。

0.5 m edta(ph8.0)

组份浓度:0.5 m edta  配制量:1 l

配制方法:称取186.1 g na2edta·2h2o,置于1 l烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌。3. 用naoh调节ph值至8.0(约20 g naoh)。注意:ph值至8.0时,edta才能完全溶解。4. 加去离子水将溶液定容至1 l。5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。6. 室温保存。

3 m 醋酸钠(ph5.2)

组份浓度:3m 醋酸钠,配制量:100ml

配制方法:1.称量40.8g naac·3h2o置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节ph值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后,室温保存。

pbs buffer

组份浓度:137 mm nacl, 2.7 mm kcl, 10 mm na2hpo4, 2 mm kh2po4,配制量:1 l

配制方法:1. 称量下列试剂,置于1 l烧杯中。nacl8g、kcl0.2g、na2hpo41.42g、kh2po40.27g2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将ph值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1 l。4. 高温高压灭菌后,室温保存。注意:上述pbs buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mm cacl2和0.5 mm mgcl2。

10×te buffer (ph7.4, 7.6, 8.0)

组份浓度:100 mm tris-hcl, 10 mm edta        配制量:1 l

配制方法:1. 量取下列溶液,置于1 l烧杯中。1m tris-hcl buffer(ph7.4,7.6,8.0)100ml500mm edta(ph8.0)20ml2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,均匀混合。3. 将溶液定容至1 l后,高温高压灭菌。4. 室温保存。

2 n naoh

组份浓度:2 n naoh 配制量:100 ml

配制方法:1. 量取80 ml去离子水置于100~200 ml塑料烧杯中(naoh溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。2. 称取8 g naoh小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。3. 待naoh完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100 ml。4. 将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。

solution i(质粒提取用)

组份浓度:25 mm tris-hcl(ph8.0), 10 mm edta, 50 mm glucose,配制量:1 l

配制方法:1. 量取下列溶液,置于1 l烧杯中。1m tris-hcl(ph8.0)25ml,0.5m edta(ph8.0)20ml,20%glucose(1.11m)45ml,dh2o910ml2. 高温高压灭菌后,4℃保存。3. 使用前每50 ml的solution i中加入2 ml的rnase a(20 mg/ml)。

2.5 n hcl

组份浓度:2.5 n hcl 配制量:100 ml

配制方法:1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸(11.6 n),均匀混合。2. 室温保存。

5 m nacl

组份浓度:5 m nacl 配制量:1 l

配制方法: 1. 称取292.2 g nacl置于1 l烧杯中,加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至1 l后,适量分成小份。3. 高温高压灭菌后,4℃保存。

20% (w/v) glucose

组份浓度:20% (w/v) glucose,配制量:100 ml

配制方法:1. 称取20 g glucose置于100~200 ml烧杯中,加入约80 ml的去离子水后,搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 高温高压灭菌后,4℃保存。

10% (w/v) sds

组份浓度:10% (w/v)sds、配制量:100ml

配制方法:1.称量10g高纯度的sds置于100-200ml烧杯中,加入约80ml的去离子水,68℃加入溶解2.滴加浓盐酸调节ph值至7.23.将溶液定容至100ml后,室温保存。

1 m dtt

组份浓度:1 m dtt  配制量:20 ml

配制方法:1. 称取3.09 g dtt,加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的0.01 m naoac(ph5.2),溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。3. 适量分成小份后,-20℃保存。

10 mm atp

组份浓度:10 mm atp 配制量:20 ml

配制方法:1. 称取121 mg na2atp·3h2o,加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的25 mm tris-hcl(ph8.0),搅拌溶解。3. 适量分成小份后,-20℃保存。

1.5 m tris-hcl (ph8.8)

组份浓度:1.5 m tris-hcl,配制量:1 l

配制方法:1. 称量181.7 g tris置于1 l烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。3. 用浓盐酸调节ph值至8.8。4. 将溶液定容至1 l。5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定ph值,因为tris溶液的ph值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的ph值大约降低0.03个单位。

10 m 醋酸铵

组份浓度:10 m 醋酸铵、配制量:100 ml

配制方法:1. 称量77.1 g醋酸铵置于100~200 ml烧杯中,加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。

苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)

配制方法:1. 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2. 配制方法:将tris-hcl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24 : 1)混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。