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常用染色液及常用培养基的制备

一、营养琼脂培养基

1、成分:蛋白胨10g,牛肉膏3g,nacl5g,琼脂15~20g,蒸馏水1000ml

2、制法:将除琼脂以外的各种成分溶解于蒸馏水内,加入15%naoh溶液约2ml,校正ph值至7.2~7

.4。加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化。分装于烧瓶(质量分数)内,121℃高压灭菌15min。

注:此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面。若用于菌落计数,琼脂质量分数为1.5%;若做成平板或斜面,则应为2%

二、乳糖胆盐发酵管

1、成分:蛋白胨20g,猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g,乳糖10g,0.04%(质量分数)溴甲酚紫水溶液25ml,蒸馏水1000ml(ph值7.4)

2、制法:将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中,校正ph值,加入指示剂,分装每管10ml,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min

注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。

三、乳糖发酵管

1、成分:蛋白胨20g,乳糖10g,0.4g/l溴甲酚紫水溶液25ml,蒸馏水1000ml(ph值=7.4)

2、制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正ph值,加入指示剂后,按检验要求分装30ml、10ml或3ml,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min

注:①双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。②30ml和10ml。乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3ml乳糖发酵管供大肠菌群证实实验用。

四、马铃薯葡萄糖琼脂(pda)

1、成分

马铃薯300g,葡萄糖20g,琼脂20g,蒸馏水1000ml

2、制法

将马铃薯去皮切块,加1000ml蒸馏水,煮沸10~20min。用纱布过滤,补加蒸馏水至1000ml.加入葡萄糖和琼脂,加热溶化,分装,121℃高压灭菌20min

3、用途:分离培养霉菌

五、孟加拉红培养基

1、成分

蛋白胨5g,葡萄糖10g,mgso4(mgso4·7h2o)0.5g,kh2po41g,琼脂20g,1/3000孟加拉红溶液100ml,蒸馏水1000ml,氯霉素0.1g

2、制法

将上述各成分加入蒸馏水中溶解后,再加孟加拉红溶液。另用少量乙醇溶液溶解氯霉素,加入培养基中,分装后,121℃高压灭菌20min

3、用途:分离霉菌和酵母

六、0.1%美蓝牛乳培养基

1、成分

新鲜脱脂牛乳90ml,10g/l美蓝水溶液10ml

2、制法

将上述成分混合,分装试管,121℃高压灭菌15min

七、伊红美蓝琼脂(emb)

1、成分:蛋白胨10g,乳糖10g,k2hpo42g,琼脂17g,2%(质量分数)伊红y溶液20ml,6.5g/l美蓝溶液10ml,蒸馏水1000ml(ph值=7.1)

2、制法:将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正ph值,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min,备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷却至50~55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。

八、革兰氏染色法

1、结晶紫染色液

(1)成分:结晶紫1g,95%(体积分数)乙醇20ml,10g/l草酸铵水溶液80ml。

(2)制法:将结晶紫溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。

2、革兰氏碘液

(1)成分碘1g,ki2g,蒸馏水300ml

(2)制法:先将碘与ki进行混合,然后加入蒸馏水少许,充分振荡,待完全溶解后,再加蒸馏水至300ml

3、沙黄复染液

(1)成分:沙黄0.25g,95%(体积分数)乙醇10ml,蒸馏水90ml

(2)制法:将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释

七、高盐察氏培养基

1、成分:nano32g,蒸馏水1000ml,mgso4(mgso4·7h2o)0.5g,kh2po41g,feso40.01g,nacl60g,蔗糖30g,琼脂20g,kcl0.5g

2、制法:加热溶解分装后,115℃高压灭菌30min。必要时可酌量增加琼脂。

3、用途:分离霉菌用

八、65g/lnacl肉汤

1、成分

肉浸液(ph=7.6)100ml,nacl6.5g

2、制法

将上述成分混合,分装试管,121℃高压灭菌15min

九、ph=9.6葡萄糖肉汤

普通肉汤校正ph=9.6,加入0.2%(质量分数)葡萄糖

十、40%(体积分数)胆汁肉汤

1、成分

ph=7.6肉浸液60ml,葡萄糖0.12g,牛胆汁40ml

2、制法

将上述成分混合,分装试管,121℃高压灭菌15min

十一、淀粉水解培养基

1、成分

ph=7.6肉浸液琼脂90ml,羊血清5ml,30g/l淀粉溶液10ml

2、制法

1)将肉浸液琼脂溶化

2)待冷却至50℃左右,以无菌操作加入淀粉溶液及无菌羊血清混合后,倾注平板。

十二、精氨酸水解培养基

1、成分

蛋白胨0.1g,nacl0.5g,k2hpo40.6g,精氨酸1g,16g/l溴甲酚紫乙醇溶液1.4ml,琼脂0.3g,蒸馏水100ml(ph=7.2)

2、制法

将上述各成分(除溴甲酚紫乙醇溶液外)加入蒸馏水中,加热溶解,校正ph=7.2,加入溴甲酚紫乙醇溶液,分装试管,121℃高压灭菌15~20min

十三、乳酸杆菌糖发酵管

1、基础成分

牛肉膏5g,蛋白胨5g,酵母浸膏5g,吐温80 0.5ml,琼脂1.5g,16g/l溴甲酚紫乙醇溶液1.4ml,蒸馏水1000ml

2、按0.5%(质量分数)加入所需糖类,并分装小试管

十四、七叶苷培养基

十五、改良tja培养基(改良番茄汁琼脂培养基)

1、成分

番茄汁50ml,酵母抽提液5g,肉膏10g,乳糖20g,葡萄糖2g,k2hpo42g,吐温801g,乙酸钠5g,蒸馏水1000ml(ph=6.8±0.2)

2、制法

1)番茄汁的制作:将新鲜番茄洗净,切碎(切勿捣碎),放入三角烧瓶;置4℃冰箱中8~12h,取出后用纱布过滤即可。若一次使用不完,将其置入0℃冰箱可保存4个月。使用时让其在常温下自然溶解。

2)培养基的制法:将所有成分加入蒸馏水中,加热溶解,校正ph=6.8±0.2。分装于烧瓶内,高压灭菌121℃,15~20min。临用时加热溶化琼脂,冷却至50℃时使用。

十六、改良mc培养基

1、成分

大豆蛋白胨5g,牛肉浸膏5g,酵母浸膏5g,葡萄糖20g,乳糖20g,caco310g,琼脂15g,蒸馏水1000ml,硫酸多黏菌素b(10万国际单位)

2、制法

将前面7种成分加入蒸馏水中,加热溶解,校正ph=6,加入中性红溶液。分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15~20min。临用时加热溶化琼脂,冷却至50℃,酌情加或不加硫酸多黏菌素b(检样有胖听或开罐后有异味等怀疑有杂菌污染时,可加多黏菌素b,混匀后使用)



1、成分

蛋白胨5g,k2hpo41g,七叶苷3g,枸橼酸铁0.5g,16g/l溴甲酚紫乙醇溶液1.4ml,蒸馏水100ml

2、制法

将上述各成分(除溴甲酚紫乙醇溶液外)加入蒸馏水中,加热溶解,加入溴甲酚紫乙醇溶液,分装试管,121℃高压灭菌15~20min

十七、ml7培养基

1、成分

植物蛋白胨5g,聚蛋白胨5g,牛肉膏2.5g,酵母提取物5g,抗坏血酸0.5g,琼脂15g,b-甘油磷酸二钠19g,mgso4 (mgso4·7h2o)0.25g,蒸馏水1000ml(ph=7.1)

2、制法

加热溶解各组分,加热至120℃灭菌15min

十八、mrs培养基

1、成分

蛋白胨10g,肉浸膏10g,酵母浸膏5g,葡萄糖20g,吐温80 1ml,k2hpo42g,醋酸钠5g,柠檬酸二铵2g,mgso4 (mgso4·7h2o)2g,mnso4(mnso4·4h2o)50mg,琼脂15g,蒸馏水1000ml(ph=6.2~6.4)

2、制法

加热溶解各组分,于120℃灭菌15min

十九、改良chaimers培养基

1、成分

大豆蛋白胨3g,肉浸膏3g,酵母浸膏3g,葡萄糖20g,乳糖20g,caco320g,10g/l中性红溶液5ml,硫酸多黏菌素b(100iu/ml),琼脂15g,蒸馏水1000ml(ph=6.0)

2、制法

加热溶解各组分,加热至120℃高压灭菌15~20min