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霉菌的形态观察实验

实验目的
了解霉菌形态,掌握微生物载玻片湿室培养方法。

实验内容

1.根霉假根的观察。

2.霉菌载玻片湿室培养。

3.曲霉、青霉、根霉、毛霉形态观察。

一、实验材料和用具

产黄青霉(penicfillium chrysogenum)、黑曲霉(aspergillus niger)、黑根霉(rhizopus nigrians)、总状毛霉(mucor racemosus)等斜面菌种。

半固体pda培养基、乳酸苯酚固定液、棉蓝染色液、20%甘油;

透明胶带、剪刀、培养皿、载玻片、口形玻棒搁架、盖玻片、圆形滤纸片、细口滴管、镊子、显微镜、接种环。

二、操作步骤

(一)霉菌的载玻片湿室培养

可4人合作,每人制作一霉菌的载玻片。

1.准备湿室 在培养皿底铺一张圆形滤纸片,其上放一“冂”形载玻片搁架,在搁梁上放一块载玻片和两块盖玻片,盖上皿盖,外用纸包扎,经12lc湿热灭菌30min后,置60℃烘箱中烘干,备用。

2.接种 用接种环挑取少量待观察的霉菌孢子至湿室内的载玻片上,每张载玻片可接同一菌种的孢子两处。接种时只要将带菌的接种环在载玻片上轻轻碰几下即可(务必记住接种的位置)。

3.加培养基 用无菌细口滴管吸取少量融化约60℃的培养基,滴加到载玻片的接种处,培养基应滴得圆而薄,其直径约为0.5cm(滴加量一般以l/2小滴为宜)。

4.加盖玻片 在培养基未彻底凝固前.用无菌镊子将皿内盖玻片盖在琼脂块薄层上,用镊子轻压,使盖玻片和载玻片间的距离相当接近,但不能压扁,否则不透气。

5.倒保湿剂 每皿倒大约3ml 20%的无菌甘油,使皿内的滤纸完全润湿,以保持皿内湿度,皿盖上注明菌名、组别和接种日期。此为制成的载玻片湿室,置28℃恒温培养3~5d。

(二)黑根霉假根的培养

将融化的pda培养基,冷却至50℃倒入无菌平皿,其量约为平皿高度的l/2。冷凝后,用接种环沾取根霉孢子,在平板表面划线接种。然后将平皿倒置,在皿盖内放一无菌载玻片,于28℃培养2~3d后,可见根霉的气生菌丝倒挂成胡须状,有许多菌丝与载玻片接触,并在载玻片上分化出假根和匍匐菌丝等结构(图13—1)。

(三)镜检观察

1.湿室培养霉菌镜检载玻片 从培养16~20h开始,通过连续观察,可了解孢子的萌发、菌丝体的生长分化和子实体的形成过程。将湿室内的载玻片取出,直接置于低倍镜和高倍镜下观察曲霉、青霉、毛霉、根霉等霉菌的形态,重点观察菌丝是否分隔,曲霉和青霉的分生孢子形成特点,曲霉的足细胞,根霉和毛霉的孢子囊和孢囊孢子。绘图。

2.粘片观察 取一滴棉蓝染色液置于载玻片中央,取一段透明胶带,打开霉菌平板培养物,粘取菌体,粘面朝下,放在染液上。镜检。

3.假根观察 将培养根霉假根的平皿打开,取出皿盖内的载玻片标本,在附着菌丝体的一面盖上盖玻片,置显微镜下观察。只要用低倍镜就能观察到假根及从根节上分化出的孢子囊梗、孢子囊、孢囊孢子和两个假根间的匍匐菌丝,观察时注意调节焦距以看清各种构造。

4.制成永久装片 把观察到霉菌形态较清晰,完整的片子,制成标本作较长期保存。制备方法是,轻轻揭去盖玻片,如果载玻片上有琼脂,仔细挑去,然后滴加少量乳酸苯酚固定液,盖上清洁盖玻片,在盖玻片四周滴加树胶封固。

三、注意事项

载玻片湿室培养时,盖玻片不能紧贴载玻片,要彼此有极小缝隙,一是为了通气;二是使各部分结构平行排列,易于观察。