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食品和水质中大肠杆菌测试方法

一、食品大肠杆菌检验适用范围:适用于各类食品、饮用水、原料和纯净水等样品中大肠菌群的快速测定和快速计数。

二、快速检验方法的原理:将乳糖、显色剂和选择性培养基加载在纸片上,经培养后能够在纸片上生长并发酵乳糖产酸的即为大肠菌群阳性,记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数,根据大肠菌群mpn表查出相应的大肠菌群数。

三、快速检验操作方法:

方法(1)1样品处理:无菌称取样品25g(或25ml)放入含有225ml灭菌生理盐水的采样瓶或均质杯中,经充分振摇做成1:10的样品匀液,用1ml灭菌吸管吸取1:10样品匀液,注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内,振摇试管制成1:100的稀释液。以此类推,每个稀释度更换一支灭菌吸管。2接种:选取两个稀释度进行接种,普通食品一般采用1:10和1:100这两个稀释度,饮料和饮用水采用原液和1:10两个稀释度。每份由三片大纸片(接10ml),六片小纸片(接1ml)组成,大片每小袋二张叠放算作一片。用灭菌吸管吸取10 ml 1:10稀释液加到含有大纸片的塑料袋中(相当于接样品1g),吸透后平放,做三个重复。再用1ml灭菌吸管吸取1 ml同一稀释液涂布到含有小纸片的塑料袋中(相当于接样品0.1g),做三个重复。再取一支1 ml灭菌吸管吸取1 ml 1:100稀释液涂布到含有小纸片的塑料袋中(相当于接样品0.01g),做三个重复。3 培养:将接种好的纸片(可叠放)放入37°c培养箱中培养15h~24h。

方法(2) 1取样接种:用灭菌吸管吸取10ml水样插入装有大纸片的塑料薄膜袋中,均匀涂布,共做5个重复;分别取1ml水样加到小纸片中,共接5个重复;另取1ml水样加到9ml无菌水中混匀,用1ml灭菌吸管分别吸取1ml(即0.1ml水样),加到最后5片小纸片中。2培养:将接种好的纸片平放于培养箱中,37℃培养15h。3结果判断:观察每片颜色变化,若纸片保持紫蓝色不变为大肠菌群阴性,纸片变黄或在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性。4报告结果:根据每个稀释度的阳性反应纸片数,查mpn表可得出水样中大肠杆菌的mpn值。

四、数据结果判断与计数分析:若纸片变黄或在黄色背景上呈现红色斑点为大肠菌群阳性纸片。纸片保持紫兰色不变或在紫兰色背景上呈现红色斑点,但周围没有黄色均为大肠菌群阴性纸片。记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数,根据大肠菌群mpn表查出相应的大肠菌群数。如接种的第一个稀释度的稀释液为原液,应将表上查出的结果除以10,以此类推。

五、检测方法特点:与国标法中的九管法相对应,将原来几步的试验简化为一步,时间由78h缩短为24h以内,省去了制备培养基、消毒和培养器皿的清洗处理等大量辅助性工作,随时可以打开包装进行抽样检测。注意事项:如果样品的酸碱度在ph7以下,应先用灭菌1mol/l氢氧化钠(naoh)调节溶液调至中性,避免因ph的原因导致的纸片变黄而影响结果观察。