食品中的黄曲霉素m1真的那么难测吗?-ag捕鱼平台

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食品中的黄曲霉素m1真的那么难测吗?

1. 试用范围:牛奶,奶粉,发酵乳,干酪,奶油等乳制品

2. 方法原理:黄曲霉毒素m1易溶于极性溶剂,因此均匀基质中的黄曲霉毒素m1可以通过甲醇/水震荡分散提取,对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。本方法采用免疫亲和柱净化,荧光检测器测定乳制品中黄曲霉毒素m1。

3. 所需设备和耗材黄曲霉毒素免疫亲和柱:welchrom? iac (1ml,25支/盒;3ml,15支/盒);高效液相装置带荧光检测器;

均质机;水平振荡器;spe转接头及50ml大容量上样器:welchrom? spe adapter;分析天平(精度0.02 g);spe装置带抽真空系统:welchrom? spe device;黄曲霉毒素m1标准品;pbs 缓冲溶液:称取1.16 g na2hpo4,0.20 g kh2 po4,8 g nacl和0.2 g kcl 溶于900ml水中,用hcl或naoh调节ph至7.4,然后定容至1000ml;甲醇(色谱纯);乙腈(色谱纯);正己烷(分析纯)。

4. 样品前处理

牛奶样品

1. 称取25g(精确至0.01 g)混匀的样品,置于50 ml具塞离心管中,水浴加热至35℃~37 ℃,6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液,待净化;

2. 发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)

3. 称取25 g(精确至0.01 g)混匀的样品,用0.5mol/l的naoh溶液调节ph值至7.4,9500r/min下均质5 min,水浴加热至35℃~37 ℃,6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液,待净化。

4. 乳粉和粉状婴幼儿配方乳制品

5. 称取10 g(精确至0.01 g)样品置于250 ml烧杯中,加入50 ml约50 ℃的水于乳粉中,玻璃棒搅拌均匀。溶解后冷却至室温,移入100 ml容量瓶中,水洗烧杯并转移洗涤液,用pbs定容至刻度后装入离心管6000转/分钟下离心15 min,混合上清液,取50ml上清液待净化。

干酪

切取均质的样品5g(精确至0.01 g)于50 ml离心管中,加2 ml水和30 ml甲醇,9500 r/min下匀浆5 min,超声提取30 min,6000r/min下离心10 min。收集上清液并移入250 ml分液漏斗中,同时加入30 ml正己烷,振摇2 min,分层后,弃去正己烷层。重复用正己烷提取2次。提取液减压浓缩至约2 ml,转移浓缩液至离心管,烧瓶用甲醇-水溶液(1 4)5 ml分2次洗涤并倒入50 ml离心管中,加pbs溶液稀释至50 ml,6000r/min下离心5 min,上清液待净化。

奶油

称取5g(精确至0.01 g)试样,置于50 ml烧杯中,用20 ml正己烷将其溶解并移于250ml具塞锥形瓶中。加20 ml水和30 ml甲醇,振荡30 min后,将全部液体移于分液漏斗中,待分层后,将下层溶液全部移到100 ml圆底烧瓶中,旋转蒸发仪减压浓缩至约5 ml,加pbs稀释至约50ml,待净化。

5. 免疫亲和柱净化(3cc)

1. 将iac装于固相萃取装置上,接上大体积上样器,10ml pbs溶液活化柱子,流速保持在2–3 ml/min,确保上样前柱子保留少量(0.5ml)的pbs溶液,活化液不收集;

2. 将待净化液加入免疫亲和柱,流速不超过5 ml/min,不收集流出液;

3. 用约20ml去离子水淋洗柱子,流速不超过5 ml/min,抽真空1分钟,不收集流出液;

4. 用1.5ml甲醇洗脱,流速控制在1d/s,收集洗脱液过膜后上机测试。

注:免疫亲和柱从冰箱去除需升到室温后使用

6. 色谱条件:

色谱柱: ultimate? xb-c18 250 mm x 4.6 mm,5μm(上海月旭提供)

预柱: ultimate? c18,5μm,ult5bg18(上海月旭提供)

流动相: 水:甲醇:乙腈=11:4:5

柱温: 35℃

检测波长: 发射波长:365nm,激发波长:450nm

进样量: 100μl