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实验一线操作,微生物检测过程中的问题

1.微生物实验过程中使用的移液枪怎么灭菌?
答:移液枪用纱布包好,外面报纸包好灭菌。不能湿热灭菌的枪,在枪口处塞入少许棉花,外面采用表面灭菌的方法擦拭灭菌,里面采用热空气交换法或者洁净空气交换法处理。



2.微生物实验过程中如果移液枪枪头想要重复使用怎么办?

答:枪头盒装好,报纸包好灭菌。枪头少的话放入平皿或者小烧杯后,报纸包好灭菌。



3. 微生物实验回收率上下限是多少?

答:50—200%(药典规定)。



4. 灭菌后的物品怎么保存,几天内可以继续使用?

答:移液管、平皿之类的工器具没打开放无菌室一般可以放置两个星期左右。灭菌后的培养基放冰箱冷藏保存通常可放一星期。



5.gb4789.10-2016金黄色葡萄球菌检验中培养时间很多都改成了24-48h ,这个跨度有点大,具体怎么判定啊?

答:如果培养24h后已经长菌就不需要再进行培养了;如果培养24h后未长菌则需要继续培养至48h。



6.请教食品车间人员手部微生物检测的具体方法?

答:①被检人员双手五指并拢,用浸湿生理盐水的脱脂棉在手指曲面,从指尖、指沟处到指端来回涂抹2次(一只手涂抹面积约30平方厘米)。
②将脱脂棉放到10ml灭菌生理盐水采样管内,盖紧试管,详细标记取样点和取样时间。
③将取好的样品送到检测,由检测员将每只样试管振打80次或用混匀器充分混匀,取1ml样液,放入灭菌平皿内,倾注营养琼脂,每个样品平行接种两块平皿,同时接种一个空白样,在平皿上详细标记取样点和取样时间。
④将采样后的平皿在35-37℃条件下培养48±2小时后取出查看结果,计数平板上的细菌菌落数;(将采样后的平皿在27-29℃条件下培养5-7天后取出查看结果,计数平板上的霉菌菌落数)。

具体可参照标准 gb 15979-2002。



7.培养皿上用记号笔写的字,用酒精擦完还有残留的颜色咋办?

 答:有二个办法:一,棉球做成小球球(和医生擦的那种大小)然后泡酒精里,用时候少量多次。这样残痕少。第二个办法:买点去污粉,先统一找块抹布蘸去污粉把字先擦拭掉,然后再去统一擦拭去污粉,然后清水洗净。



8.微生物一般默认是不用做回收率,感觉是约定俗成的了,但是为什么呢?有时候会有做化学的朋友问我,但是又没有一个特别好的解释。大家有没有很权威的或者理论支持很强的理由呢?

答:应该是因为微生物分布的不均匀性吧,另外微生物会生长繁殖,也是重要的影响因素啊;食品行业没有强制要求而已;制药行业微生物检验方法验证是要求做回收率的,详见《中国药典》2015年版四部通则与《中国药品检验标准操作规范》2010年版中“微生物限度检查”有关内容。



9.内审时,专家提出高压灭菌器的灭菌时间没有校准,可是,当地的省计量院计量高压灭菌器时依据的标准只需要对温度和压力进行校准,没有时间项目,这个该如何整改? 

答:这里提供一个可行性方案:增加秒表,操作员进行秒表与灭菌器进行校准书写记录,每年对秒表进行校准。



10.一般在超净工作台里开紫外灯,然后把玻璃门关下。如果不能穿透玻璃,是不是在超净工作台外还要在开一个紫外灯灭菌啊?

答:紫外线是不能穿透玻璃的,因为紫外线波长短,能量不高,穿透能力比较弱,只能做表面的杀菌,且作用有效距离只有1.5米;紫外线是不能穿透玻璃的,超净工作台外还要在开一个紫外灯灭菌。



11.车间生产一锅洗洁精(菌落总数检验方法按gb4789.2),生产完(产品中添加防腐剂)立即取样检验菌落总数结果是300cfu/g,隔一天后重新取样菌落总数是<10cfu/g,取样时间不同结果差距这么大,是因为防腐剂将菌落抑制杀死了吗,还是检验操作出现问题了?有时候感觉微生物检验不确定因素太多了,比如同一个罐里同时取的原料(两个平行样),同时检验得出的结果差距很大,一个有检出一个没检出菌落,都不知道到底有没有被污染?
答:微生物不同其他的项目,比如一些理化指标,只要搅拌均匀了,数据的分布也是很均匀的,不会因取样的位置变化而发生大的变化,但微生物就不一样了,本来产品里面存在就少,还分布不均匀,而且样品还经过了稀释,所以加入到培养基里面的试液是否含菌就很难说。
比如即使你取的样品里面取到了含菌的部分,但最后做实验的时候却只是抽样的一小部分,并且又经过生理盐水的稀释,然后再从这个稀释液里面取1ml去培养,那这1ml里面能抽到菌体的可能性是多大呢?如果刚好抽到一个,那培养之后就是一个菌落。防腐剂一般不杀菌。只有抑菌作用。


12.无菌室有霉菌了,怎么除掉啊?采用施特白熏蒸后还是有霉菌,怎么办啊?

答:一般选择进行熏蒸和除湿,采用施特白季铵盐还没有氯有效,建议采用过氧乙酸熏蒸,并在熏蒸时把无菌室风机关上,熏蒸完,静置30分钟再打开风机排弃。



13.审核老师提出高压蒸汽灭菌锅需要考压力容器作业证去哪报名?

答:市场监管局或质量技术监督局的特种设备管理科室。



14.哪些奶粉需要检测阪崎肠杆菌?

答:一般一段奶粉都需要,为保证其质量,与其相关原辅料,包材以及与奶粉接触的均需要,当然包括奶粉量勺。依据gb10765-2010。



15.食品大肠菌群检测,依照现在的国标用什么培养基检测啊?需要进行复发酵实验吗?

答:mpn法所用培养基为:初发酵为lst,复发酵是bglb。平板计数法所用培养基为vrba和bglb。



16.新版本的8538中的严格厌氧菌应该使用那种呢,用双歧杆菌是否可以呢,请教各位老师们!

答:可以用双歧杆菌。



17.有人做过gb/t18204.4-2013公共用品用具的微生物检测吗,国标写“公共场所用品用具每件用品采集2份样“,因为是物品不同部位采集两份,那么做菌落、金葡等检测是两份样品都要用检液测平行,还是随机抽一份样品做菌落平行,另一份样品做其他项目?因为公共用品用具要做菌落、大肠、金葡、溶血链球、真菌,如果两份样都做同一项目平行样品显然不够用,而且工作量大,还有该检测大肠菌群用多少检样导入乳糖胆盐发酵培养基,一定要10ml检液吗?另外想问问公共卫生的致病菌金葡与溶血性链球菌的标准菌株是买什么编号,第几代的菌做阳性对照实验?请帮忙解答下,非常感谢!

答:两份不同部位隶属于同一样品,合二为一实验处理;是的大肠菌群检液10ml;标准菌株编号参照gb 4789.28,工作菌株采用3、4代为宜。



18.菌落总数等检测项目用的稀释液:225ml生理盐水,这个时候的用的“生理盐水”算培养基吗? 如何做质量验收?gb 4789.28《培养基和试剂的质量要求》 中也没有提到。

答:生理盐水算自制培养基,要做配制记录,但是验收只做供应商和感官就好。把生理盐水作为一种检测用试剂,使用前填写配制记录、灭菌记录,没有质量验收一说,也可以。



19.微生物培养箱需要定期消毒吗?若消毒,消毒频率如何定?用哪种消毒方式?

答:①需要消毒。
②频率自行规定,我们要求每周,有文件规定。
③可以用湿毛巾擦定后,再用一块干燥的软毛巾擦干,再喷洒75%的酒精。