苯酚法测定可溶性糖-ag捕鱼平台

ag捕鱼平台主页 > 技术知识 >

苯酚法测定可溶性糖

【原理】

植物体内的可溶性糖主要指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测定可溶性糖的原理是:糖在浓硫酸作用下,脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物,在10~100μg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比,且在485nm波长下有最大吸收峰,故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定,方法简单,灵敏度高,基本不受蛋白质存在的影响,并且产生的颜色稳定160min以上。

【仪器 与用具】

分光光度计;电炉;铝锅;20ml刻度试管;刻度吸管5ml 1支,1ml 2支;记号笔;吸水纸适量。

【试剂 】

1.90%苯酚溶液 称取90g苯酚(ar),加蒸馏水10ml溶解,在室温下可保存数月;

2.9%苯酚溶液 取3ml 90%苯酚溶液,加蒸馏水至30ml,现配现用;

3.浓硫酸(比重1.84);

4.1%蔗糖标准液 将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重,精确称取1.000g。加少量水溶解,移入100ml容量瓶中,加入0.5ml浓硫酸,用蒸馏水定容至刻度;

5.100μg/ml蔗糖标准液 精确吸取1%蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中,加水定容。

【方法】

1.标准曲线的制作

取20ml刻度试管 11支,从0~10分别编号,按表24-1加入溶液和水。

表24-1 各试管 加溶液和水的量

 

管 号

0

1~2

3~4

5~6

7~8

9~10

100μg/ml蔗糖液(ml)

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

水(ml)

2.0

1.8

1.6

1.4

1.2

1.0

蔗糖量(μg)

0

20

40

60

80

100

 

然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液,摇匀,再从管液正面快速加入5ml浓硫酸,摇匀。比色液总体积为8ml,在恒温下放置30min,显色。然后以空白为参比,在485nm波长下比色测定,以糖含量为横坐标,光密为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程。

2.可溶性糖的提取

取新鲜植物叶片,擦净表面污物,剪碎混匀,称取0.10~0.30g,共3份,或干材料。分别放入3支刻度试管中,加入5~10ml蒸馏 水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min(提取2次),提取液过滤入25ml容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至刻度。

3.测定 吸取0.5ml样品液于试管中(重复2次),加蒸馏 水1.5ml,同制作标准曲线的步骤,按顺序分别加入苯酚,浓硫酸溶液,显色并测定光密度。由标准线性方程求出糖的量,按下式计算测试样品中糖含量。

可溶性糖含量(mg/g)= [c×(v/a)×n]/(w×103 )

式中 c-标准方程求得糖量(μg);

a-吸取样品液体积(ml);

v-提取液量(ml);

n -稀释倍数;

w-组织重量(g)。