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实验室常用多种缓冲液配置方案

1)1 m tris-hcl (ph7.4, 7.6, 8.0)
组份浓度:1 m tris-hcl
配制量:1 l
配制方法:
1. 称量121.1 g tris置于1 l烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的ph值。
ph值 浓hcl
7.4 约70ml
7.6 约60ml
8.0 约42ml
4. 将溶液定容至1 l。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定ph值,因为tris溶液的ph值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的ph值大约降低0.03个单位。

2)10×te buffer (ph7.4, 7.6, 8.0)
组份浓度:100 mm tris-hcl, 10 mm edta
配制量:1 l
配制方法:
1. 量取下列溶液,置于1 l烧杯中。
1m tris-hcl buffer(ph7.4,7.6,8.0) 100ml
500mm edta(ph8.0) 20ml
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,均匀混合。
3. 将溶液定容至1 l后,高温高压灭菌。
4. 室温保存。

3)1.5 m tris-hcl (ph8.8)
组份浓度:1.5 m tris-hcl
配制量:1 l
配制方法:
1. 称量181.7 g tris置于1 l烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节ph值至8.8。
4. 将溶液定容至1 l。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定ph值,因为tris溶液的ph值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的ph值大约降低0.03个单位。

4)3 m 醋酸钠(ph5.2)
组份浓度:3m 醋酸钠
配制量:100ml
配制方法:
1.称量40.8g naac·3h2o置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节ph值至5.2
3.加去离子水将溶液定容至100ml
4高温高压灭菌后,室温保存。

5)pbs buffer
组份浓度:137 mm nacl, 2.7 mm kcl, 10 mm na2hpo4, 2 mm kh2po4
配制量:1 l
配制方法:
1. 称量下列试剂,置于1 l烧杯中。
nacl 8g
kcl 0.2g
na2hpo4 1.42g
kh2po4 0.27g
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 滴加浓盐酸将ph值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1 l。
4. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:上述pbs buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mm cacl2和0.5 mm mgcl2。

6)10 m 醋酸铵
组份浓度:10 m 醋酸铵
配制量:100 ml
配制方法:
1. 称量77.1 g醋酸铵置于100~200 ml烧杯中,加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。
4. 密封瓶口于室温保存。
注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。

7)苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)
配制方法:
1. 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2. 配制方法:将tris-hcl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24 : 1)混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

8)10% (w/v) sds
组份浓度:10% (w/v)sds
配制量:100ml
配制方法:
1.称量10g高纯度的sds置于100-200ml烧杯中,加入约80ml的去离子水,68℃加入溶解
2.滴加浓盐酸调节ph值至7.2
3.将溶液定容至100ml后,室温保存。

9)2 n naoh
组份浓度:2 n naoh
配制量:100 ml
配制方法:
1. 量取80 ml去离子水置于100~200 ml塑料烧杯中(naoh溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。
2. 称取8 g naoh小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。
3. 待naoh完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100 ml。
4. 将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。

10)2.5 n hcl
组份浓度:2.5 n hcl
配制量:100 ml
配制方法:
1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸(11.6 n),均匀混合。
2. 室温保存。

11)5 m nacl
组份浓度:5 m nacl
配制量:1 l
配制方法:
1. 称取292.2 g nacl置于1 l烧杯中,加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至1 l后,适量分成小份。
3. 高温高压灭菌后,4℃保存。

11)20% (w/v) glucose
组份浓度:20% (w/v) glucose
配制量:100 ml
配制方法:
1. 称取20 g glucose置于100~200 ml烧杯中,加入约80 ml的去离子水后,搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 高温高压灭菌后,4℃保存。

12)solution i(质粒提取用)
组份浓度:25 mm tris-hcl(ph8.0), 10 mm edta, 50 mm glucose
配制量:1 l
配制方法:
1. 量取下列溶液,置于1 l烧杯中。
1m tris-hcl(ph8.0) 25ml
0.5m edta(ph8.0) 20ml
20%glucose(1.11m) 45ml
dh2o 910ml
2. 高温高压灭菌后,4℃保存。
3. 使用前每50 ml的solution i中加入2 ml的rnase a(20 mg/ml)。

13)solution ii(质粒提取用)
组份浓度:200mm naoh,1%(w/v)sds
配制量:500ml
配制方法:
1.量取下列溶液,置于500ml烧杯中
10% sds 50ml
2n naoh 50ml
2.加灭菌水定容至500ml,充分混匀
3.室温保存,此溶液保存时间最好不要超过一个月
注意:sds易产生气泡,不要剧烈搅拌

14)solution iii(质粒提取用)
组份浓度:3 m koac, 5 m ch3cooh
配制量:500 ml
配制方法:
1. 称量下列试剂,置于500 ml烧杯中。
koac                  147g 
ch3cooh 57.5ml
2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。
4. 高温高压灭菌后,4℃保存。

15)0.5 m edta(ph8.0)
组份浓度:0.5 m edta
配制量:1 l
配制方法:
称取186.1 g na2edta·2h2o,置于1 l烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌。
3. 用naoh调节ph值至8.0(约20 g naoh)。
注意:ph值至8.0时,edta才能完全溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1 l。
5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。
6. 室温保存。

16)1 m dtt
组份浓度:1 m dtt
配制量:20 ml
配制方法:
1. 称取3.09 g dtt,加入到50 ml塑料离心管内。
2. 加20 ml的0.01 m naoac(ph5.2),溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。
3. 适量分成小份后,-20℃保存。

17)10 mm atp
组份浓度:10 mm atp
配制量:20 ml
配制方法:
1. 称取121 mg na2atp·3h2o,加入到50 ml塑料离心管内。
2. 加20 ml的25 mm tris-hcl(ph8.0),搅拌溶解。
3. 适量分成小份后,-20℃保存。