实验室常用缓冲液、试剂的配制方法-ag捕鱼平台

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实验室常用缓冲液、试剂的配制方法

#1 m tris-hcl (ph7.4, 7.6, 8.0)#
组份浓度:1 m tris-hcl
配制量:1 l
配制方法:
1. 称量121.1 g tris置于1 l烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的ph值。
4. 将溶液定容至1 l。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定ph值,因为tris溶液的ph值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的ph值大约降低0.03个单位。



#10&timete buffer (ph7.4, 7.6, 8.0)#
组份浓度:100 mm tris-hcl, 10 mm edta
配制量:1 l
配制方法:
1. 量取下列溶液,置于1 l烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,均匀混合。
3. 将溶液定容至1 l后,高温高压灭菌。
4. 室温保存。

#1.5 m tris-hcl (ph8.8)#
组份浓度:1.5 m tris-hcl
配制量:1 l
配制方法:
1. 称量181.7 g tris置于1 l烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节ph值至8.8。
4. 将溶液定容至1 l。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定ph值,因为tris溶液的ph值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的ph值大约降低0.03个单位。

#3 m 醋酸钠(ph5.2)#
组份浓度:3m 醋酸钠
配制量:100ml
配制方法:
1.称量40.8g naac·3h2o置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的去离子水搅拌溶解
2.加入冰醋酸调节ph值至5.2
3.加去离子水将溶液定容至100ml
4高温高压灭菌后,室温保存。


#buffer#
组份浓度:137 mm nacl, 2.7 mm kcl, 10 mm na2hpo4, 2 mm kh2po4
配制量:1 l
配制方法:
1. 称量下列试剂,置于1 l烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 滴加浓盐酸将ph值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1 l。
4. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:上述 buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mm cacl2和0.5 mm mgcl2。


#10 m 醋酸铵#
组份浓度:10 m 醋酸铵
配制量:100 ml
配制方法:
1. 称量77.1 g醋酸铵置于100~200 ml烧杯中,加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。
4. 密封瓶口于室温保存。
注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。


#tris-hcl平衡苯酚#
配制方法:
1. 使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致rna和dna的交联等。因此,苯酚的质量对dna、rna的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2. 操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。

3. 苯酚平衡:因为在酸性ph条件下dna分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其ph值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下:
① 液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。
② 加入羟基喹啉(8-quinolinol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、rna酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色,有助于方便识别有机相。
③ 加入等体积的1 m tris-hcl(ph8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
④ 重复操作步骤③。
⑤ 加入等体积的0.1 m tris-hcl(ph8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
⑥ 重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。
⑦ 使用ph试纸确认有机相的ph值大于7.8。
⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)
配制方法:
1. 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2. 配制方法:将tris-hcl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24 : 1)混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。


#10% (w/v) sds#
组份浓度:10% (w/v)sds
配制量:100ml
配制方法:
1.称量10g高纯度的sds置于100-200ml烧杯中,加入约80ml的去离子水,68℃加入溶解
2.滴加浓盐酸调节ph值至7.2
3.将溶液定容至100ml后,室温保存。

#2 n naoh#
组份浓度:2 n naoh
配制量:100 ml
配制方法:
1. 量取80 ml去离子水置于100~200 ml塑料烧杯中(naoh溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。
2. 称取8 g naoh小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。
3. 待naoh完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100 ml。
4. 将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。

#2.5 n hcl#
组份浓度:2.5 n hcl
配制量:100 ml
配制方法:
1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸(11.6 n),均匀混合。
2. 室温保存。


#5 m nacl#
组份浓度:5 m nacl
配制量:1 l
配制方法:
1. 称取292.2 g nacl置于1 l烧杯中,加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至1 l后,适量分成小份。
3. 高温高压灭菌后,4℃保存。

#20% (w/v) glucose#
组份浓度:20% (w/v) glucose
配制量:100 ml
配制方法:
1. 称取20 g glucose置于100~200 ml烧杯中,加入约80 ml的去离子水后,搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。
3. 高温高压灭菌后,4℃保存。

#solution i(质粒提取用)#
组份浓度:25 mm tris-hcl(ph8.0), 10 mm edta, 50 mm glucose
配制量:1 l
配制方法:
1. 量取下列溶液,置于1 l烧杯中。
2. 高温高压灭菌后,4℃保存。
3. 使用前每50 ml的solution i中加入2 ml的rnase a(20 mg/ml)。


#solution ii(质粒提取用)#
组份浓度:200mm naoh,1%(w/v)sds
配制量:500ml
配制方法:
1.量取下列溶液,置于500ml烧杯中
10% sd 50ml
2n naoh50ml
2.加灭菌水定容至500ml,充分混匀
3.室温保存,此溶液保存时间最好不要超过一个月
注意:sds易产生气泡,不要剧烈搅拌

#solution iii(质粒提取用)#
组份浓度:3 m koac, 5 m ch3cooh
配制量:500 ml
配制方法:
1. 称量下列试剂,置于500 ml烧杯中。
2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。
4. 高温高压灭菌后,4℃保存。

#0.5 m edta(ph8.0)#
组份浓度:0.5 m edta
配制量:1 l
配制方法:
1. 称取186.1 g na2edta·2h2o,置于1 l烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌。
3. 用naoh调节ph值至8.0(约20 g naoh)。
注意:ph值至8.0时,edta才能完全溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1 l。
5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。
6. 室温保存。

#1 m dtt#
组份浓度:1 m dtt
配制量:20 ml
配制方法:
1. 称取3.09 g dtt,加入到50 ml塑料离心管内。
2. 加20 ml的0.01 m naoac(ph5.2),溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。
3. 适量分成小份后,-20℃保存。

#10 mm atp#
组份浓度:10 mm atp
配制量:20 ml
配制方法:
1. 称取121 mg na2atmiddot;3h2o,加入到50 ml塑料离心管内。
2. 加20 ml的25 mm tris-hcl(ph8.0),搅拌溶解。
3. 适量分成小份后,-20℃保存。