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培养基移种方法有哪些?

 一、斜面培养基移种技术
(1)材料

琼脂斜面培养基

经分离培养的平板培养物。

(2)方法

①在琼脂斜面培养基试管上部标明移种的菌名(或编号)、接种日期、接种者的组别及代号。

②左手持长有细菌的平板底,右手持接种环。接种环在火焰上灭菌冷却后,沾取平板划线上发育良好的孤立菌落。把平板放回原处,立即用此手取斜面培养基斜持,用右手小指与手掌夹持棉塞,轻轻转动后拨出棉塞,管口通过火焰灭菌。

③将已沾菌的接种环伸入斜面培养基的管底部的凝固水,沿斜面培养基的表面从底向上划一直线,然后再从底部向上划连续曲折线;也可不划直线只划曲折线。取出接种环,管口通过火焰灭菌,塞好棉塞,放试管架上,接种环火焰灭菌后放下。

向斜面培养基上移种的细菌如果是生长在斜面培养基上的,或是生长在液体培养基中的,则用左手同时斜持菌种管和斜面培养基两个管,右手无名指、小指手掌同时拔起夹持二个棉塞。管口及接种环先经火焰灭菌后,从菌种管取菌立即移种到斜面上,塞好棉塞,接种环火焰灭菌后放下。然后将斜面培养基放37℃恒温箱中培养24h。结果斜面表面形成菌苔。

二、液体培养基移种技术

用于纯种细菌的增菌及观察细菌在液体环境中的生长特征(混浊生长,表面生长或沉淀生长)

(1)材料

肉汤培养基

斜面培养物(大肠埃希菌、化脓性链球菌、枯草芽胞杆菌)

(2)方法

①取接种环在火焰上灼烧灭菌、冷却。

②以“双管移植法”左手持细菌斜面培养物和肉汤培养基两支试管,右手持接种环,按无菌操作法取少量细菌,将沾菌的接种环在斜倾的接近液面的管壁上轻轻涂抹研匀,试管直立使沾附在管壁上的细菌没入液体中,接种后放37℃恒温箱中培养。

(3)结果

①浑浊生长大肠埃希菌菌液呈均匀混浊,管底有少量沉淀。

②沉淀生长化脓性链球菌菌液管底有沉淀,菌液无明显浑浊。

③菌膜生长枯草芽胞杆菌菌液表面形成膜状物。

三、半固体培养基移种技术

用于保存菌种及间接检查细菌有无动力。

(1)材料

半固体培养基。

细菌斜面培养物。

(2)方法

①将接种针经火焰灭菌冷却后,从斜面培养物表面沾取细菌。

②用无菌法穿刺接种,将接种针刺入半固体培养基正中央,深度达距管底0.5cm处停止,然后循原路退出。注意在刺入及拔出时要保持接种针不向穿刺线外摆动。

③试管口通过火焰灭菌,塞上棉塞。接种针经火焰灭菌。培养物放37℃恒温箱中培养。

(3)结果:有动力的细菌呈扩散生长,无动力的细菌沿穿刺线生长。