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微生物培养基使用中常出现的问题及解答

工作中发现,有部分检验员对培养基的使用存在障碍,借此机会和大家分享讨论一下大家常见的对培养基存在的一些疑问。


1、培养基煮沸溶解后再高压灭菌,还是直接高压灭菌存在疑惑。

拿麦康凯琼脂举个例子,溶解后灭菌,平板上没有不溶的结晶紫,没有紫色的斑点;相对比未溶解灭菌的,平板上有结晶紫和紫色的斑点。所以正确的做法是先煮沸溶解后再高压灭菌。



2、培养基ph值为什么不在标准范围内?

其实出现这个情况的问题有很多种,大致我分为这么6大点:

①质量不好(生产厂家出厂时ph就不正确);

②灭菌问题(高压灭菌温度过高或灭菌时间过长,导致葡萄糖类焦化从而ph降低);

③保存时间(超过保质期或结块);

④水质出现问题(可以用去离子水、纯化水、蒸馏水不能用矿泉水、自来水);

⑤保存温度(保存温度过高);

⑥光线直射总结本人认为以上6点都可能导致培养基ph出现偏差,如果出现此类问题,建议逐一排查,直到问题解决。



3、培养基高压灭菌时为什么会焦化?

不少检验人员在实验时,发现经过灭菌的培养基有焦化现象,我认为引起此现象的主要原因有以下4点:

①可能你灭菌的时候温度超过了121℃(正常115-116℃20min即可);

②灭菌时间过长;

③培养基在容器中装的太多(不要超过容器容量的80%);

④灭完菌的培养基在高温环境中保存的时间过长,这些都会导致培养基发生焦化现象。



4、培养基ph怎么测定?

通常分两种情况:

①对于无需高压灭菌的培养基,先煮沸溶解后再冷却至25℃时,测定其ph值(固体培养基至少测2个点,取其平均值);

②对于需要高压灭菌的培养基,高压灭菌后,冷却至25℃测其ph(固体培养基至少测2个点,取其平均值)。



5、含琼脂培养基在倒平板为什么有时候不凝固或凝固不好?

针对以上情况,我做了分析:

①针对需要高压灭菌的培养基,倒平板时候要先摇匀(因为琼脂分子量比较大,在冷却过程中容易沉淀到底部,导致琼脂分散不均匀);

②针对无需高压灭菌的培养基,一次煮沸溶解后不能直接倒平板,应重复煮沸溶解3-5次(因为一次不能确保琼脂完全溶解)。



6、为什么同一品牌的不同批号,粉末颜色有差别?

分析可能有3个原因:

①此培养基成分含有染料或指示剂;

②不同批次粉末培养基含水量不同,一般要求≤6%,含水量越高,颜色越深;

③加工时球磨时间越长颜色越深。