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葛根含量测定方法(葛根素)

   葛根为豆科植物野葛pueraria lobata(willd.)ohwi的干燥根。2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法测定其葛根素的含量。
    一、高效液相色谱法
    2005版《中国药典》葛根含量测定项下:
    色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(25:75)为流动相;检测波长为250nm。理论板数按葛根素峰计算应不得低于4000。
    供试品溶液的制备:取本品粉末约0.1g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入30%乙醇50ml,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用30%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
    hplc法测定葛根及其制剂中葛根素的含量时,使用最多的流动相系统为甲醇-水系统,另外还有甲醇-水,加醋酸调节ph等。
    a:以甲醇-水为系统的,常见的比例及实验条件为:
    ①waters2695/ 2996/ empower 色谱系统;色谱柱symmetry c18 柱( 3.9mm×150mm, 5μm);流动相:甲醇-水(25:75);dad检测波长254nm;柱温35℃。
    ②sp8800 型高效液相色谱泵;hypersil ods (4.6mm×250mm,5μm大连依利特科学有限公司);流动相:甲醇-水(30:70);柱温40℃;检测波长250nm。
    ③waters高效液相色谱仪;十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);甲醇-水(40:60)为流动相;检测波长为250nm;柱温30℃。
    ④美国spectra-physics 液相色谱仪;色谱柱lunm c18 (150mm×4.6mm, 5μm ) 不锈钢柱(美国phenom enex 公司);流动相为甲醇-水(28:72);检测波长250nm;柱温30℃。
    b:乙腈-水系统:
    ①lc-10atvp高效液相色谱仪;hypersil ods 色谱柱(4.6mm×150mm,5μm);乙腈-水(15:85)为流动相;检测波长250nm。
    ②tsp 高效液相色谱仪;色谱柱turner c18h37(5μm,4.6mm×150mm);流动相:乙醇-水(43:207);柱温30℃;检测波长250nm。
    c:加酸调节的,如:
    ①lc-10a高效液相色谱仪;色谱柱为odsc18柱(5μm,4.6mm×150mm);流动相为甲醇-水(35:65),内含0.01%醋酸;柱温35℃;检测波长251nm。
    ②sp-8800高效液相色谱仪;色谱柱ods-c18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-1.4%醋酸溶液( 22:78 );柱温室温;测定波长: 250nm。
    ③美国beckman公司高效液相色谱仪;hypersil ods柱(2.5μm,4.6mm×250mm);流动相为甲醇-氯仿-1.5%冰醋酸(22:1:77);检测波长250nm。
    ④sp1000 高效液相色谱泵;色谱柱ymc c18不锈钢柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相:甲醇-水醋酸(42∶100:0.2);检测波长250nm;柱温:室温。
    其它如:吕竹芬等测定心血宁滴丸中葛根素的含量,采用高效液相色谱法,dikma piamonsil c18色谱柱(4.6mm×200mm,5μm),以甲醇-乙腈-水(30:2 :65)为流动相,流速为1.0ml/min,检测波长250nm。
    颜春华等测定脑得生片中葛根素的含量,采用日本岛津lc-4a高效液相色谱仪;色谱柱diamonsiltm (钻石) c18(200mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-甲醇-0.1%枸橼酸溶液(5:25:75);紫外检测波长250nm;柱温室温。
    制备样品溶液时,一般以30%乙醇、50%乙醇、乙醇、甲醇、流动相或盐酸溶液(9→1000)等为溶剂,采用超声法提取。

    二、其它
    杨振林等测定葛根冲剂中葛根素含量,采用薄层- 紫外分光光度法,751gd 型分光光度计(上海分析仪器总厂)。薄层层析硅胶g板,以氯仿-甲醇-水(7:28:0.2)为展开剂,在紫外灯(365nm)下定葛根素位置,刮下斑点,用甲醇洗脱,测定波长为251±1nm。
    崔小兵等测定通脉颗粒剂中葛根素及阿魏酸的含量,采用双波长(λ1= 250nm ,λ2=313nm) 梯度洗脱法。waters 2690 型高效液相色谱仪;色谱柱kromasil c18柱(4.6mm×250mm,5μm);柱温为30℃,甲醇-1%醋酸水梯度洗脱;检测波长为250nm;柱温30℃。
    方崇波等采用离子络合紫外分光光度法测定葛根素及其制剂的含量,采用uv4/2401 紫外分光光度计(岛津)。方法::在ph=4.0条件下,葛根素和al3 形成络合物,在339.8 nm波长处通过测定吸收度的改变来测定含量。