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食品微生物菌落总数测定的操作要点

根据食品卫生标准要求和对样品污染情况的估计,选择2~3个稀释度。加入样品时要注意外来的污染。

培养基倾注的温度与厚度是实验正确与否的关键。(倾注的温度:一般35~45℃,温度过高会造成已受损伤的菌细胞死亡。厚度:直径9cm的平皿一般要求15~20ml培养基,若培养基太薄,在培养过程中可能因水分蒸发而影响细菌的生长)。

为防止细菌增殖及产生片状菌落,在加入样液后,应在15min内倾注培养基。检样与培养基混匀时,可先向一个方向旋转,然后再向相反方向旋转。旋转中应防止混合物溅到皿边的上方。

l培养基凝固后,应在尽快将平皿翻转培养,保持琼脂表面干燥,尽量避免菌落蔓延生长,影响计数。

l为控制污染,在实验过程中,应在工作台上打开一块琼脂平板,其暴露时间应与检样从制备、稀释到加入平皿时所暴露的最长时间相当,然后与检样一同培养,以了解检样在操作过程中有无受到来自外界的污染。培养温度:每种不同样品中的细菌都有一定的生理特性,培养时应用不同的营养条件及生理条件可能得出不同的结果,因而应根据检测标准的要求选择适当的培养温度和培养时间。

l食品:36±1℃,48±2h 。

l饮用水:36±1℃,48h 。

l水产品:30±1℃,72±3h。(36℃培养和30℃培养结果差别较大,同样水产品48h结果和72h也有差别。

对照试验:

l检样的稀释液中往往带有食品颗粒,在这种情况下,为避免与细菌菌落混淆,可作一检样对照,不经培养,置4℃环境放置,在计数时用于对照。

l或可选用ttc营养琼脂作培养基。

食品微生物菌落计数:

l如果高稀释度平板上的菌落数比低稀释度平板上的菌落数高,则说明检验过程中可能出现差错或样品中含抑菌物质,这样的结果不可用于结果报告。

l如果平板上出现链状菌落,菌落间没有明显的界限,这可能是琼脂与检样混匀时,一个细菌块被分散所造成的。一条链作为一个菌落计。若培养过程中遭遇昆虫侵入,在昆虫爬行过的地方也会出现链状菌落,也不应分开计数。

l如果平板上菌落太多,不能计数时,不能用多不可计作报告。应在最高稀释度平板上任意选取2个1cm2的面积,计算菌落数,除2求出每cm2面积内平均菌落数,乘以63.6(皿底面积cm2数)。

l如果检样是微生物类制剂(酸牛奶、酵母制酸性饮料等),在进行菌落计数时应将有关微生物(乳酸菌、酵母菌)排除,不可并入检样的菌落总数内作报告。 每个样品从开始稀释到倾注最后一个平板的时间不得超过15min,目的是为了使菌落能在平板上均匀分布,否则,时间放长了,样液可能由于干燥而贴在平板上,倾注琼脂后不易摇开,容易产生片状菌落,影响菌落计数。另外,琼脂凝固后不要在室温长时间放置,应及时将平皿倒置培养,可避免菌落的蔓延生长。

检验过程中应用稀释液做空白对照,用以判定稀释液、培养基、平皿或吸管可能存在的污染。同时,检验过程中应在工作台上打开一块空白的平板计数琼脂,其暴露时间应与检验时间相当,以了解检样在检验过程中有无受到来自空气的污染。

检样稀释液有时带有食品颗粒,为避免与细菌发生混淆,可以作一检样稀释液与平板计数琼脂混合的平皿,不经培养,于4℃冰箱放置,以便在计数时用作对照。另外也可以在已熔化而保温在45℃水浴内的平板计数琼脂中,按100ml加1ml0.5%氯化三苯四氮唑(ttc)水溶液,培养后食品颗粒不变色,细菌为红色。