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粗蛋白质测定法(gb5511-85)

 本标准适用于商品粮食、油料中粗蛋白质含量的测定。

1 仪器和用具

1.1 凯氏烧瓶:50ml;

1.2 圆底烧瓶:1000ml;

1.3 万用电炉;

1.4 锥形烧瓶:100ml;

1.5 微量滴定管:5ml、刻度0.01ml;

1.6 容量瓶:50ml;

1.7 移液管:5ml;

1.8 量筒:10ml;

1.9 洗耳球;

1.10 凯氏微量蒸馏装置(见下图),胶管等。

2 试剂

2.1 浓硫酸—过氧化氢—水混合液(2∶1∶3):在100ml水中缓慢加入浓硫酸200ml,冷却后再加入30%过氧化氢300ml,混匀备用。此液存放阴凉处可保存一个月。

2.2 混合催化剂:硫酸铜(cuso4·5h2o)10g,硫酸钾(a·r)100g,硒粉0.2g,在研钵中研细使通过40目筛,混匀后备用;

2.3 40%氢氧化钠溶液;

2.4 2%硼酸溶液;

2.5 0.01n盐酸溶液;

2.6 甲基红乙醇溶液:0.1g甲基红溶于75ml95%乙醇中(先在研钵中加乙醇研磨);

2.7 次甲基蓝乙醇溶液:0.1g次甲基蓝溶于80ml95%乙醇中。临用时将以上两液按2∶1比例混合即成,在酸域呈紫红色,在ph5.5时溶液无色,在碱域呈绿色。

3 操作方法

3.1 消化

按照含有10~30mg粗蛋白质计算试样用量,一般可称取试样0.2~0.3g(w,精确到0.0001g),用蜡光纸卷着倒入50ml凯氏烧瓶中,加混合催化剂1g,同时加入硫酸—过氧化氢—水混合液3~5ml,稍加振摇,斜置于电炉上,在通风橱内加热进行消化。开始时用低温加热,勿使瓶中泡沫超过瓶肚的三分之二,待泡沫减少和烟雾变白后再增加温度保持微沸。消化到溶液呈浅蓝绿色的透明状时,再继续加热沸腾10min,取出待消化液冷却至室温后,加水10~20ml,再待溶液温度降到室温后,干净地转入50ml容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀备用。

3.2 蒸馏

按照凯氏微量蒸馏装置图的安装进行蒸馏和吸收。

在烧瓶8内加水400ml和少量碎玻璃片,加5滴混合指示剂,加几滴酸液使水呈紫红色,连接4,1,2,并检查有无漏气处。



(兰冠教育学院供图)
打开簧夹7,关闭活塞6,加热烧瓶8,待瓶1内溶液开始沸腾时开始计时,经2min降低瓶3,使冷凝管下端露出液面,再蒸馏1min后,用水冲洗管下端。
    量取30ml1%硼酸溶液注入锥形瓶3内,加混合指示剂2滴,使冷凝管下端插入液面下1cm处。量取稀释的消化液5ml,由漏斗5注入瓶1内,再加水10ml,冲洗漏斗5。量取40%氢氧化钠溶液1ml,提起活塞注入瓶1内,立即用水2~5ml冲洗漏斗5。施紧活塞,这时瓶1内溶液总体积不要超过其容量的一半。

    蒸馏结束后,掐紧簧夹7,断绝蒸气,使瓶1内溶液全部吸入管4中,放松簧夹7,从漏斗5加入蒸馏水40~50ml,再通蒸气加热和回流,将瓶1洗涤一次备用。

3.3 滴定

用0.01n盐酸溶液滴定瓶3中的吸收液,滴至溶液出现浅紫红色为止。

为消除试剂误差,除不加试样外,按照上述操作方法,做一次空白试验。

4 结果计算


式中:v—蒸馏时取用稀释的消化液体积,ml;
粗蛋白质的干基含量按下列公式计算:

v1—实验用去的盐酸溶液体积,ml;

v0—空白试验用去的盐酸溶液体积,ml;

14—每毫克当量盐酸相当于氮的毫克数;

n—盐酸溶液的当量浓度,n;

p—蛋白质换算系数(小麦5.7,其他谷物及豆类6.25);

w—试样重量,mg;

m—试样水分百分率,%。

双试验结果允许差:粗蛋白质含量在15.0%以下时,不超过0.2%;粗蛋白质含量在15.1%以上时,不超过0.4%。求其平均数,即为测定结果,测定结果取小数点后第一位。

注:①消化过程中,若硫酸损失过多时,可酌量补加硫酸,勿使瓶内干涸。

②消化液加水稀释后,应及时进行蒸馏,否则应保存消化液,临用时加水稀释。

③加入蒸馏瓶1内的碱液,必须过量。

④也可使用由0.2%甲基红乙醇溶液1份和0.2%溴甲酚绿乙醇溶液5份配制的混合指示剂(临用时混合),终点为灰红色。