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食品微生物培养基制作和注意事项

1、培养基的分类

据组成成分可分为:

1.合成培养基:由各种纯化学物质按一定比例配制而成。

2.半合成培养基:有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。

3.天然培养基:利用天然来源的有机物配制而成。

 按用途可分为

1.基础培养基:能满足各种微生物的营养需求

加富培养基:加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质,使其快速生长,便于分离

3.选择培养基:加入某种物质抑制其他微生物生长,使目标微生物得到富集,便于分离

4.鉴别培养基:用来检测微生物的某些代谢特性。

2、培养基的配制

(1)称量

按培养基的配方准确称取各成分,其中牛肉膏放在小烧杯里称量,其他成分放在称量纸上称量。

(2)溶化

用烧杯先装少许水,依次将药品倒入铝锅中,加足水,然后在电炉上加热溶化。

(3)ph值

用精密的ph试纸测定,并用1%氧化钠或5%盐酸调节到所需的ph值。

(4)过滤

趁热用纱布将培养基进行过滤。

(5)分装

过滤后根据不同需要,立即趁热装入试管或三角瓶等容器中。

 微生物培养基培养的注意事项

(1)不要使培养基沾在管口,如沾上,需用干净的纱布擦干净。

(2)液体培养基:分装高度以试管的1/4左右为宜。

(3)固体培养基:分装试管,其装量为管高的1/6~1/5灭菌后制成斜面。分装三角瓶容量之一半为宜。

(4)半固体培养基:分装试管一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后,垂直待凝成半固体深层琼脂。

(6)做棉塞

装好培养基的试管都要加上棉塞,这样既可过滤空气,避免杂菌侵入,又可减缓培养基水分的蒸发,制棉塞的方法多种,形状各异,总原则如下:

(1)用脱脂棉制作(脱脂棉花易吸水)

(2)松紧适合

(3)塞头不要太大,一般为球状。

(7)包装

试管口或三角瓶口棉塞部分,用牛皮纸扎,以防灭菌时水蒸气打湿棉塞。

(8)灭菌

灭菌是指杀死物品上或环境中的所有微生物。

灭菌方法可分为四种:物理灭菌、机械灭菌、化学灭菌和生物灭菌。

物理灭菌:1、热力灭菌:

2、紫外光灭菌:一般应用于无菌室和接种箱的灭菌。

•干热灭菌:适用于玻璃仪器,将物品放入烘箱,160~170oc,1~2小时。

•火焰灭菌:适用于常用用具,如接种环、镊子等。灭菌方法是放在火焰上直接灼烧。

•湿热灭菌:

•(1)高压蒸汽灭菌:适用于培养基、衣物等的灭菌。

•(2)间歇蒸汽灭菌:适用于不耐高温的培养基或无高压蒸汽灭菌锅时。

•(3)巴斯德灭菌:适用于牛乳类等不耐高温的物体。

紫外光灭菌:一般应用于无菌室和接种箱的灭菌

高压蒸汽灭菌

•高压蒸汽灭菌锅是一个耐高压又密闭的金属锅。它是利用在密闭条件下产生高压蒸汽来达到灭菌的效果。其温度在100oc以上,有强大的杀菌能力。因此它是一种用途广泛,效率高的灭菌工具。

•分类:1、卧式 2、立式

•具体操作步骤:

•(1)加入适量自来水于灭菌锅中(至水位线)

•(2)摆入上述包装好的待灭菌的培养基,注意:不要摆得太挤,以免影响蒸汽流通和灭菌效果。

•(3)加盖旋紧螺旋,使蒸汽锅密闭不漏气(对角线均匀拧旋)

•(4)打开放气阀,打开电源,自开始产生蒸汽后10分钟(此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽)关紧放气阀,让温度随蒸汽压力上升而上升,当达所需压力时(15磅/时2)控制热源维持所需时间(30分钟)然后停止加热,让其自然冷却。

•(5)待压力降至0磅时,打开排气阀,再打开锅盖,取出灭菌物。

•注意:压力未降至0磅时,切勿打开锅盖,否则突然降压,招致培养基沸腾,沾湿棉塞,甚至冲出管外。

•(6)自锅中取出灭菌好的培养基,放置稍冷却后摆成斜面,而后至37oc恒温箱培养24小时,无菌生长,方可保存备用。

• 应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前,必须将锅内的冷空气完全排尽,否则虽然压力表已指15磅/时,但锅内的温度还只有100oc,结果往往造成灭菌不彻底。