有机食品菌落总数的检测方法-ag捕鱼平台

ag捕鱼平台主页 > 技术知识 >

有机食品菌落总数的检测方法

1 范围

本标准规定了食品中菌落总数(aerobic plate count)的测定方法。

   本标准适用于食品中菌落总数的测定。

2 术语和定义

2.1  菌落总数 aerobic plate count

食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每g(ml)检样中形成的微生物菌落总数。

3 设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:

3.1  恒温培养箱:36 ℃±1 ℃,30 ℃±1 ℃。

3.2  冰箱:2 ℃~5 ℃。

3.3  恒温水浴箱:46 ℃ ±1 ℃。

3.4  天平:感量为 0.1 g。

3.5  均质器。

3.6  振荡器。

3.7  无菌吸管:1 ml(具 0.01 ml 刻度)、10 ml(具 0.1 ml 刻度)或微量移液器及吸头。

3.8  无菌锥形瓶:容量 250 ml、500 ml。

3.9  无菌培养皿:直径 90 mm。

3.10  ph计或 ph比色管或精密 ph试纸。

3.11  放大镜或/和菌落计数器。

4 培养基和试剂

4.1  平板计数琼脂培养基

4.2  磷酸盐缓冲液

4.3  无菌生理盐水

5 检验程序

菌落总数的检验程序见图1。

菌落总数的检验程序

6 操作步骤

6.1 样品的稀释

6.1.1  固体和半固体样品:称取 25 g 样品置盛有 225 ml 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min~10000 r/min 均质 1 min~2 min,或放入盛有 225 ml 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1 min~2 min,制成 1:10 的样品匀液。

6.1.2  液体样品:以无菌吸管吸取 25 ml 样品置盛有 225 ml 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成 1:10 的样品匀液。

6.1.3  用 1 ml 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液1 ml,沿管壁缓慢注于盛有 9 ml 稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成 1:100 的样品匀液。

6.1.4  按 6.1.3 操作程序,制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用 1 次1 ml 无菌吸管或吸头。

6.1.5  根据对样品污染状况的估计,选择 2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行 10 倍递增稀释时,吸取 1 ml 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取 1 ml 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

6.1.6  及时将 15 ml~20 ml 冷却至 46 ℃的平板计数琼脂培养基(可放置于 46 ±1  ℃℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。

6.2 培养

6.2.1  待琼脂凝固后,将平板翻转,36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h。水产品 30 ℃±1 ℃培养 72 h±3 h。

6.2.2  如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约 4 ml),凝固后翻转平板,按 6.2.1 条件进行培养。

6.3 菌落计数

可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-forming units,cfu)表示。

6.3.1  选取菌落数在 30 cfu~300 cfu之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30 cfu的平板记录具体菌落数,大于 300 cfu的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

6.3.2  其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。

6.3.3  当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。

7 结果与报告

7.1 菌落总数的计算方法

7.1.1  若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每 g(ml)样品中菌落总数结果。

7.1.2  若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按公式(1)计算:
有机食品菌落总数的检测方法
式中:

n——样品中菌落数;

∑c——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和;

n1——第一稀释度(低稀释倍数)平板个数;

n2——第二稀释度(高稀释倍数)平板个数;

d——稀释因子(第一稀释度) 。

有机食品菌落总数的检测方法

7.1.3  若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300 cfu,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

7.1.4  若所有稀释度的平板菌落数均小于 30 cfu,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

7.1.5  若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于 1乘以最低稀释倍数计算。

7.1.6  若所有稀释度的平板菌落数均不在30 cfu~300 cfu之间, 其中一部分小于30 cfu或大于300 cfu时,则以最接近 30 cfu或 300 cfu的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

7.2 菌落总数的报告

7.2.1  菌落数小于 100 cfu时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告。

7.2.2  菌落数大于或等于 100 cfu 时,第 3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前 2位数字,后面用 0 代替位数;也可用 10 的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。

7.2.3  若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延。

7.2.4  若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。

7.2.5  称重取样以 cfu/g 为单位报告,体积取样以 cfu/ml 为单位报告。