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天然泉水水源水大肠菌群检验作业指导书

1.0 水源水

 1.1 范围

   本法适用于天然泉水水源水大肠菌群的检验。

 1.2 原理

   根据大肠菌群细菌具有的生物特性,如革兰氏阴性无芽胞杆菌,在37℃培养24h能发酵乳糖并产气的特点,将不同量的水样接种到含乳糖的培养基中,经培养后根据阳性反应结果可测出原水样中大肠菌群的mpn值。

 1.3 培养基和试剂

  1.3.1 乳糖胆盐发酵培养液。

  1.3.2 亮绿乳糖胆盐培养液(bgb)。

  1.3.3 灭菌生理盐水。

 1.4 仪器

  1.4.1 超净工作台。

  1.4.2 高压蒸汽灭菌锅。

  1.4.3 培养箱:36℃±1℃。

  1.4.4 冰箱:0℃~8℃

  1.4.5 电子天平:感量0.1g。

  1.4.6 培养皿。

  1.4.7 小倒管。

  1.4.8 试管:150mm×20mm,140mm×15mm。

  1.4.9 吸管:10ml、5ml、1ml。

  1.4.10 接种环。

  1.4.11 酒精灯。

 1.5 检测步骤

1.5.1 推测性检验

1.5.1.1 吸取10ml水样接种到盛有10ml双料乳糖胆盐发酵培养液中,共接种5份。

1.5.1.2 吸取1ml水样接种到盛有10ml单料乳糖胆盐发酵培养液中,共接种5份。

1.5.1.3 另吸取1ml水样接种到9ml灭菌生理盐水中,混匀,用5ml灭菌吸管吸取5ml稀释液,分别加到5支盛有10ml单料乳糖胆盐发酵培养液中,每管1ml(即0.1ml水样)。轻摇试管,使液体充分混合,置36℃±1℃培养箱内培养24h。观察每支管是否产气,若有气体产生该管则为推测性检验阳性。如不产气则为大肠菌群阴性。

1.5.2 确证性试验

1.5.2.1 自推测性检验阳性管中取一接种环培养液,接种到亮绿乳糖胆盐培养液(bgb)管中,置36℃±1℃培养箱中培养48h。

1.5.2.2 观察bgb管中的产气情况,如有气体产生,就可确定为“大肠菌群阳性”;如无气体产生则为“大肠菌群阴性”。记下bgb管里产气的阳性管数,查大肠菌群(mpn)检索表可得出水样中大肠菌群的mpn值。

1.5.3 mpn值计算

如水样含菌量少,也可按100ml、10ml、1ml接种,那么其实际mpn值应为表中的mpn值除以10;反之如含菌量较多,也可接种1ml、0.1ml、0.01ml,其实际mpn值应为表中的mpn值乘以10,余此类推。

大肠菌群(mpn)检索表

(总接种量55.5ml,其中5份10ml水样,5份1ml水样,5份0.1ml水样)

接种量/ml

mpn/100ml

接种量/ml

mpn/100ml

10

1

0.1

10

1

0.1

0

0

0

0

1

0

1

1

0

0

1

2

1

0

2

6

0

0

2

4

1

0

3

8

0

0

3

5

1

0

4

10

0

0

4

7

1

0

5

12

0

0

5

9

1

1

0

1

0

1

0

2

1

1

1

6

0

1

1

4

1

1

2

8

0

1

2

6

1

1

3

10

0

1

3

7

1

1

4

12

0

1

4

9

1

1

5

14

0

1

5

11

1

2

0

6

0

2

0

4

1

2

1

8

0

2

1

6

1

2

2

10

0

2

2

7

1

2

3

12

0

2

3

9

1

2

4

15

接种量/ml

mpn/100ml

接种量/ml

mpn/100ml

10

1

0.1

10

1

0.1

0

2

4

11

1

2

5

17

0

2

5

13

1

3

0

8

0

3

0

6

1

3

1

10

0

3

1

7

1

3

2

12

0

3

2

9

1

3

3

15

0

3

3

11

1

3

4

17

0

3

4

13

1

3

5

19

0

3

5

15

1

4

0

11

0

4

0

8

1

4

1

13

0

4

1

9

1

4

2

15

0

4

2

11

1

4

3

17

0

4

3

13

1

4

4

19

0

4

4

15

1

4

5

22

0

4

5

17

1

5

0

13

0

5

0

9

1

5

1

15

0

5

1

11

1

5

2

17

0

5

2

13

1

5

3

19

0

5

3

15

1

5

4

22

0

5

4

17

1

5

5

24

0

5

5

19

2

0

0

5

1

0

0

2

2

0

1

7

2

0

2

9

3

1

5

27

2

0

3

12

3

2

0

14

2

0

4

14

3

2

1

17

2

0

5

16

3

2

2

20

2

1

0

7

3

2

3

24

2

1

1

9

3

2

4

27

2

1

2

12

3

2

5

31

接种量/ml

mpn/100ml

接种量/ml

mpn/100ml

10

1

0.1

10

1

0.1

2

1

3

14

3

3

0

17

2

1

4

17

3

3

1

21

2

1

5

19

3

3

2

24

2

2

0

9

3

3

3

28

2

2

1

12

3

3

4

32

2

2

2

14

3

3

5

36

2

2

3

17

3

4

0

21

2

2

4

19

3

4

1

24

2

2

5

22

3

4

2

28

2

3

0

12

3

4

3

32

2

3

1

14

3

4

4

36

2

3

2

17

3

4

5

40

2

3

3

20

3

5

0

25

2

3

4

22

3

5

1

29

2

3

5

25

3

5

2

32

2

4

0

15

3

5

3

37

2

4

1

17

3

5

4

41

2

4

2

20

3

5

5

45

2

4

3

23

4

0

0

13

2

4

4

25

4

0

1

17

2

4

5

28

4

0

2

21

2

5

0

17

4

0

3

25

2

5

1

20

4

0

4

30

2

5

2

23

4

0

5

36

2

5

3

26

4

1

0

17

2

5

4

29

4

1

1

21

2

5

5

32

4

1

2

26

3

0

0

8

4

1

3

31

接种量/ml

mpn/100ml

接种量/ml

mpn/100ml

10

1

0.1

10

1

0.1

3

0

1

11

4

1

4

36

3

0

2

13

4

1

5

42

3

0

3

16

4

2

0

22

3

0

4

20

4

2

1

26

3

0

5

23

4

2

2

32

3

1

0

11

4

2

3

38

3

1

1

14

4

2

4

44

3

1

2

17

4

2

5

50

3

1

3

20

4

3

0

27

3

1

4

23

4

3

1

33

4

3

2

39

5

1

4

110

4

3

3

45

5

1

2

130

4

3

4

52

5

2

0

49

4

3

5

59

5

2

1

70

4

4

0

34

5

2

2

94

4

4

1

40

5

2

3

120

4

4

2

47

5

2

4

150

4

4

3

54

5

2

5

180

4

4

4

62

5

3

0

79

4

4

5

69

5

3

1

110

4

5

0

41

5

3

2

140

4

5

1

48

5

3

3

180

4

5

2

56

5

3

4

210

4

5

3

64

5

3

5

250

4

5

4

72

5

4

0

130

4

5

5

81

5

4

1

170

5

0

0

23

5

4

2

220

5

0

1

31

5

4

3

280

接种量/ml

mpn/100ml

接种量/ml

mpn/100ml

10

1

0.1

10

1

0.1

5

0

2

43

5

4

4

350

5

0

3

58

5

4

5

430

5

0

4

76

5

5

0

240

5

0

5

95

5

5

1

350

5

1

0

33

5

5

2

540

5

1

1

46

5

5

3

920

5

1

2

63

5

5

4

1600

5

1

3

84

5

5

5

>1600

2.0 成品水

 2.1 范围

本法适用于天然泉水成品水大肠菌群的检验。

 2.2 原理

   根据大肠菌群细菌具有的生物特性,如革兰氏阴性无芽胞杆菌,在37℃培养24h能发酵乳糖并产气的特点,将不同量的水样接种到含乳糖的培养基中,经培养后根据阳性反应结果可测出原水样中大肠菌群的mpn值。

 2.3 培养基和试剂

  2.3.1 乳糖胆盐发酵培养液。

  2.3.2 亮绿乳糖胆盐培养液(bgb)。

  2.3.3 灭菌生理盐水。

 2.4 仪器

  2.4.1 超净工作台。

  2.4.2 高压蒸汽灭菌锅。

  2.4.3 培养箱:36℃±1℃。

  2.4.4 冰箱:0℃~8℃

  2.4.5 电子天平:感量0.1g。

  2.4.6 培养皿。

  2.4.7 小倒管。

  2.4.8 试管:150mm×20mm,140mm×15mm。

  2.4.9 吸管:10ml。

  2.4.10 接种环。

  2.4.11 酒精灯。

 2.5 检测步骤

2.5.1 推测性检验

2.5.1.1 吸取10ml水样接种到盛有10ml双料乳糖胆盐发酵培养液中,共接种5份。

2.5.1.2 轻摇试管,使液体充分混合,置36℃±1℃培养箱内培养24h。观察每支管是否产气,若有气体产生该管则为推测性检验阳性。如不产气则为大肠菌群阴性。

2.5.2 确证性试验

2.5.2.1 自推测性检验阳性管中取一接种环培养液,接种到亮绿乳糖胆盐培养液(bgb)管中,置36℃±1℃培养箱中培养48h。

2.5.2.2 观察bgb管中的产气情况,如有气体产生,就可确定为“大肠菌群阳性”;如无气体产生则为“大肠菌群阴性”。记下bgb管里产气的阳性管数,查用5管10ml水样时各种阳性和阴性结果组合的mpn值及其95%的可信限表。

用5管10ml水样时各种阳性和阴性结果组合的mpn值及其95%的可信限

阳性反应管数

mpn/100ml

95%可信限

下限

上限

0

0

0

6.0

1

2.2

0.1

12.6

2

5.1

0.5

19.2

3

9.2

1.6

29.4

4

16

3.3

52.9

5

>16

8.0

无限